如何让MRD检测更灵敏、更精准?

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微小残留病灶(minimal residual disease ，MRD)检测在医学领域的发展近年来呈现出日新月异的态势，其研究及应用范围从血液肿瘤领域逐渐扩展至实体瘤领域，为实体瘤患者的疾病管理打开了一扇窗。

与此同时，由于肿瘤来源的DNA片段在血液中的含量极低，MRD检测也面临着灵敏度、特异度等挑战。在近日举行的第二十一届中国国际检验医学暨输血仪器试剂博览会(CACLP)罗氏诊断卫星会上，燃石医学技术官张之宏博士深入阐述了MRD检测的临床应用价值，并分享了提高检测灵敏度的关键路径和相关研究进展。

诊疗“照妖镜”：捕捉残留，寻微觅迹

基于循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA，ctDNA)的MRD检测是癌症治疗后的重要评估工具。若检测结果呈阳性，则通常意味着患者治疗后仍有癌细胞残留，它们可能重新活跃并导致疾病复发。相反，阴性结果则表明癌症治疗后体内未检测到残留病灶，为患者的预后提供了积极信号。

张博士指出，在实体瘤领域，MRD检测相比传统影像学手段具有显著优势，能够更早地发现癌细胞的复发与转移情况，不仅有助于医生地评估患者预后，还能为个性化治疗方案的制定提供科学依据，特别是在术后或治疗后的管理、免疫治疗的患者筛选以及术后治疗方式的选择上，MRD检测都发挥着重要作用。

近年来基于ctDNA检测的MRD研究证据不断积累，MRD检测已逐渐走入实体瘤的临床实践。张博士分享到：“例如，研究表明，对早期乳腺癌术后进行ctDNA检测，ctDNA阳性患者有更高复发风险、预后不良1;IMvigor010研究表明，只有尿路上皮癌患者术后ctDNA阳性患者方可从免疫治疗中获益2;DYNAMIC研究显示，肠癌术后 MRD 阴性患者的减治疗(不化疗)3 年复发率不劣于标准化疗组3。这些研究成果充分展示了MRD检测在实体瘤治疗中的重要地位。”

在MRD的临床实践应用中，仍有部分检测技术难点亟需解决，如灵敏度要求高、突变具有个性化特点、测序深度高、降噪要求高等。张博士表示，灵敏度是MRD 检测的大瓶颈，其灵敏度往往需要达到万分位的数量级，才能满足临床所需。通常而言，提高检测灵敏度的路径包括增能、降噪和扩容。

“‘增能’是提高建库效率，提高投入量，增加测序深度。‘降噪’意味着降低背景噪音与干扰。此外，我们还可以通过‘扩容’，也就是检测更多数量的位点来进一步提升灵敏度。”张博士进一步解释道，“在高灵敏度的要求下，除了大幅增加测序深度来提升突变检测的灵敏度之外，整个检测的实验流程(包括试剂盒、仪器、采样和操作SOP等)以及生信分析流程的可靠性和稳定性是重中之重。”

FDA SEQC2研究表明建库效率在提高检测灵敏度方面的重要性，当肿瘤丰度低于0.5%时，受建库效率影响，增加测序深度也无法带来灵敏度的提升4，因此建库试剂盒在整个检测流程中扮演着关键的角色，建库试剂盒的主要作用是将ctDNA转化为可以测序的DNA分子。“目前市场上主流建库试剂盒游离核酸(circulating free DNA，cfDNA)的文库转化效率约为40%-60%，罗氏诊断即将推出的新型建库试剂盒KAPA EvoPrep Kit，实测数据显示其在条件下cfDNA的文库转化效率可高达80%~85%，这意味着更多的肿瘤相关信息能够被准确捕获和分析，从而提高MRD检测的灵敏度和准确性。” 张博士说道。

罗氏诊断中国高级总监-生命科学部王峰表示：“作为全球体外诊断领导者，罗氏诊断致力于提供从样本前处理、文库构建、靶向捕获到数据分析的‘样本进、结果出’全流程自动化解决方案，并开发了全球的全自动测序文库制备系统AVENIO Edge System，可为提高MRD检测的灵敏度和准确性、以及临床应用转化提供有力支持。我们希望基于医疗领域的丰富经验和技术创新，与更多合作伙伴共同推动这一领域的发展，为患者带来更为精准和个性化的诊疗方案，造福更多中国患者。”

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